描述

Dasatinib hydrochloride 是一種有效的 AblWT/Src 雙重抑制劑，IC50 值分別為 0.6 nM/0.8 nM；同時抑制 c-KitWT/c-KitD816V，IC50 值分別為 79 nM/37 nM。

相關類別

信號通路 >> 自噬 >> 自噬

信號通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> BCR-ABL

信號通路 >> 蛋白酪氨酸激酶 >> SRC

研究領域 >> 癌癥

靶點

IC50: 0.6 nM/0.8 nM (AblWT/Src)[1] IC50: 79 nM/37 nM (c-KitWT/c-KitD816V)[2]

體外研究

達沙替尼在較窄的范圍內（IC50≤1.7nM）有效抑制野生型Abl激酶和除T315I外的所有突變體。與伊馬替尼相比，達沙替尼（IC50：0.8 nM）對Ba / F3細胞中表達野生型Bcr-Abl的細胞的效力高出325倍[1]。

體內研究

在第10天開始每日用達沙替尼（50mg / kg）治*療。使用該方法，在治*療后6天（第16天，P = 0.014）觀察到BCPAP原位腫瘤生長的顯著抑制，其持續至第23天和與載體**的小鼠相比，29（P = 0.0003）[3]。達沙替尼（50 mg / kg）在大鼠中的代謝研究表明，達沙替尼是主要的循環成分，而多種代謝物在給藥后4小時對剩余的40-60％的樣品放射性有貢獻[4]。

激酶實驗

使用野生型和突變型谷胱甘肽S-轉移酶（GST）-Ab1融合蛋白（c-Abl氨基酸220-498）的激酶測定進行了微小的改變。 GST-Abl融合蛋白在使用前從谷胱甘肽 - 瓊脂糖珠中釋放出來; ATP的濃度為5μM。在用于激酶自身磷酸化和體外肽底物磷酸化測定之前，立即用LAR酪氨酸磷酸酶處理GST-Abl激酶結構域融合蛋白。在30℃溫育1小時后，通過加入釩酸鈉（1mM）使LAR磷酸酶失活。使用磷酸酪氨酸特異性抗體4G10常規地進行比較未處理的GST-Abl激酶與去磷酸化的GST-Abl激酶的免*疫印跡分析以確認酪氨酸殘基和c-Abl抗體CST 2862的完全（> 95％）去磷酸化以確認GST-Abl的相等加載。激酶。 IC50測定的抑制劑濃度范圍是0至5,000nM（伊馬替尼和AMN107）或0至32nM（達沙替尼）。對于突變體T315I，達沙替尼濃度范圍擴展至1,000nM。這些相同的抑制劑濃度用于體外肽底物磷酸化測定。在針對GST-Src激酶和GST-Lyn激酶的這些相同濃度范圍內測試三種抑制劑。

細胞實驗

將Ba / F3細胞系一式三份接種，并與升高濃度的伊馬替尼，AMN107或達沙替尼一起孵育72小時。使用基于甲硫基磺酸鹽的活力測定（CellTiter96 Aqueous One Solution Reagent）測量增殖。 IC50和IC90值報告為一式四份進行的三次獨立實驗的平均值。 IC50和IC90測定的抑制劑濃度范圍為0至2,000nM（伊馬替尼和AMN107）或0至32nM（達沙替尼）。對于IC 50> 2,000 nM的突變體，伊馬替尼濃度范圍擴展至6,400 nM。對于突變體T315I，達沙替尼濃度范圍擴展至200nM。

動物實驗

小鼠[3]使用雄性無胸腺裸鼠（25克; 5周齡）。制備達沙替尼（50mg / kg）用于在pH 3.0的80mM檸檬酸鈉緩沖液中每日口服強飼（5天/周）。對于原位鼠模型，在第10天基于生物發光活性將小鼠隨機化以接受藥*物或媒介物。在轉移性小鼠模型中，小鼠接受達沙替尼或載體，如前所述，在心內注射（預處理）之前2天開始，或在隨機化（治*療后）后第11天開始。大鼠[4]達沙替尼以0.5mg / kg口服0.5％甲基纖維素給予雄性Wistar-Han（WH）大鼠。自動化大鼠血液采集裝置被編程為以預定間隔收集200μL血液。在每個時間點，將accusampler編程為將20μL血液直接發現兩次（兩個點）到DBS卡上。將剩余的160μL液體血液收集到含EDTA鈉的管中。在以11,000rpm立即離心血液5分鐘后獲得血漿樣品。將血漿樣品儲存在-80℃直至分析。將DBS樣品在室溫下干燥至少2小時并儲存在干燥器中的塑料袋中直至樣品分析。

參考文獻

[1]. O'Hare T, et al. In vitro activity of Bcr-Abl inhibitors AMN107 and BMS-354825 against clinically relevant imatinib-resistant Abl kinase domain mutants. Cancer Res. 2005 Jun 1;65(11):4500-5.

[2]. Shah NP, et al. Dasatinib (BMS-354825) inhibits KITD816V, an imatinib-resistant activating mutation that triggers neoplastic growth in most patients with systemic mastocytosis. Blood. 2006 Jul 1;108(1):286-91.

[3]. Chan CM, et al. Targeted inhibition of Src kinase with dasatinib blocks thyroid cancer growth and metastasis. Clin Cancer Res. 2012 Jul 1;18(13):3580-91.

[4]. Shen Z, et al. Metabolite profiling of dasatinib dosed to Wistar Han rats using automated dried blood spot collection. J Pharm Biomed Anal. 2012 Aug-Sep;67-68:92-7.

分子式

C22H27Cl2N7O2S

分子量

524.46600

精*確質量

523.13200

PSA

134.75000

LogP

4.26440